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氣單胞菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

  • 更新時間:  2020-05-27
  • 產(chǎn)品型號:  50T
  • 簡單描述
  • 氣單胞菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
詳細介紹

注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

產(chǎn)品名稱

氣單胞菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

英文名稱

Aeromonas spp.

貨號

CP933875

儲存條件:

14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法:

氣單胞菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:

卡維地洛相關物質(zhì)C標準品大鼠胃腸癌標志物CA199ELISA Kit,48T/96T

卡維地洛相關物質(zhì)D標準品人胰腺癌標志物CA242ELISA Kit,48T/96T

卡維地洛相關物質(zhì)E標準品人α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA Kit,48T/96T

卡維地洛系統(tǒng)適應性混合物標準品小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA Kit,48T/96T

卡洛芬標準品人鱗狀上皮細胞癌抗原2(SCCAg-2)ELISA Kit,48T/96T

卡洛芬相關物質(zhì)A標準品人α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA Kit,48T/96T

卡莫司汀標準品小鼠α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA Kit,48T/96T

卡莫司汀相關物質(zhì)A標準品人胃癌標志物ELISA Kit,48T/96T

氣單胞菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒鹽酸卡替洛爾標準品人肺癌標志物ELISA Kit,48T/96T

蔓荊子黃素標準品人組織多肽抗原(TPA)ELISA Kit,48T/96T

(+)-兒茶酸標準品小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA Kit,48T/96T

鹽酸卡酮標準品大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA Kit,48T/96T

貓爪草提取物標準品兔子組織多肽抗原(TPA)ELISA Kit,48T/96T

頭孢克洛標準品人泛素蛋白(Ub)ELISA Kit,48T/96T

頭孢克洛△3-異構(gòu)體標準品小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA Kit,48T/96T Goat Anti-human IgM/Bio  生物素標記的羊抗人IgM兒茶素

Goat Anti-human IgM/APC  APC標記的羊抗人IgM表兒茶素

Goat Anti-human IgM/AP  堿性酸酶(AP)標記的羊抗人IgM腺苷

Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的羊抗人IgM木蘭脂素

Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的羊抗人IgM葫蘆巴堿

Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的羊抗人IgM腺嘌呤

Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的羊抗人IgM尿苷

Goat anti-human IgM whole serum  羊抗人IgM抗血清環(huán)維黃楊星D

Goat Anti-human IgM  羊抗人IgM蘇氨酸

Goat Anti-human IgG/RBITC  羅丹明標記的羊抗人IgG組氨酸

Goat Anti-human IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的羊抗人IgG黃山藥皂苷提取物

Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的羊抗人IgG雪上一枝蒿素

Goat Anti-human IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的羊抗人IgGα-蒎烯

Goat Anti-human IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的羊抗人IgG二十八烷醇

Goat Anti-human IgG/PE  PE標記的羊抗人IgG祖師麻素


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