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文氏密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒RNA質(zhì)量檢測(cè)步驟

瀏覽次數(shù):1329發(fā)布日期:2020-11-25

 文氏密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒RNA質(zhì)量檢測(cè)步驟:

1)紫外吸收法測(cè)定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測(cè)定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下:

RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測(cè)得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來測(cè)量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測(cè)

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。

2)變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS,pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

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