欧美性大战久久久久xxx,久久久久久久爽少妇毛片,久久成人国产精品免费软件,日日躁夜夜躁狠狠久久av

您好,歡迎進入上海莼試生物技術(shù)有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)熱線:13585831301
上海莼試生物技術(shù)有限公司
您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 多瘤病毒(BK) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)反應(yīng)流程常規(guī)程序

多瘤病毒(BK) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)反應(yīng)流程常規(guī)程序

瀏覽次數(shù):1518發(fā)布日期:2020-10-28

多瘤病毒(BK) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)反應(yīng)流程常規(guī)程序

將PCR反應(yīng)所需的成分配置完后,在PCR儀上于94-96℃預(yù)加熱幾十秒至幾分鐘,使模板DNA充分變性,然后進入擴增循環(huán)。在每一個循環(huán)中,先于94℃保持30秒鐘使模板變性,然后將溫度降到復(fù)性溫度(一般50-60℃之間),一般保持30秒鐘,使引物與模板充分退火;在72℃保持1分鐘(擴增1kb片段),使引物在模板上延伸,合成DNA,完成一個循環(huán)。重復(fù)這樣的循環(huán)25~35次,使擴增的DNA段大量累積。后,在72℃保持3-7min,使產(chǎn)物延伸完整,4℃保存。

2.復(fù)性(退火)和延伸溫度

復(fù)性的溫度是PCR擴增是否順利的關(guān)鍵因素,通常在50-60℃之間。具體的溫度主要由引物的Tm值決定。延伸溫度絕大多數(shù)設(shè)定為72℃。如果復(fù)性的溫度很高,可以將延伸溫度和復(fù)性溫度設(shè)置成同一溫度,變成二步法PCR。

3.反應(yīng)時間

變性步驟一般使用30秒鐘,如果模板的G+C含量較高,或直接用細(xì)胞做模板,變性時間可適當(dāng)延長。復(fù)性時間有30秒種一般是足夠的。延伸時間由擴增產(chǎn)物的大小決定,一般采用1kb用1分鐘來保證充足的時間。

4.循環(huán)次數(shù)

循環(huán)次數(shù)主要與模板的起始數(shù)量有關(guān),在模板拷貝數(shù)為104~105數(shù)量級時,循環(huán)數(shù)通常為25~35次。

平臺效應(yīng)(plateaueffect):PCR擴增過程后期會出現(xiàn)的產(chǎn)物的積累按減弱的指數(shù)速率增長的現(xiàn)象。原因:底物和引物的濃度已經(jīng)降低,dNTP和DNA聚合酶的穩(wěn)定性或活性降低,產(chǎn)生的焦磷酸會出現(xiàn)末端產(chǎn)物抑制作用,非特異性產(chǎn)物或引物的二聚體出現(xiàn)非特異性競爭作用,擴增產(chǎn)物自身復(fù)性,高濃度擴增產(chǎn)物變性不*。

5.PCR反應(yīng)液的配制

PCR反應(yīng)體系的配置方式有時也會影響反應(yīng)的正常進行。常規(guī)方法與其它酶學(xué)反應(yīng)一樣,在后加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒有帶加熱的蓋子,要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油,防止水分蒸發(fā)。

對于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時,有時會擴增不出產(chǎn)物。在遇到這個問題時,如果將反應(yīng)成分分開配制,A管含模板、引物和dNTP,以及調(diào)整體積的H2O,B管含緩沖液、DNA聚合酶和水,然后再將兩管溶液混合起來,可較好地克服這個問題。

按照常規(guī)的方法配制反應(yīng)體系,有時會出現(xiàn)非特異性擴增的問題。熱啟動(hotstart)PCR操作方式可較好解決這一問題。將dNTP、緩沖液,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蠟珠(如AmpliWaxPCRQam100),加熱熔化,再冷卻,使蠟將溶液封住,后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有當(dāng)PCR反應(yīng)進入高溫階段后,蠟層熔化,所有反應(yīng)成分才會混合在一起。

Contact Us
  • 聯(lián)系QQ:3004972506
  • 聯(lián)系郵箱:sdfskdfhs3004972506@qq.com
  • 傳真:86-021-60443211
  • 聯(lián)系地址:上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661

掃一掃  微信咨詢

©2025 上海莼試生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有  備案號:滬ICP備17029297號-3  技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    GoogleSitemap    總訪問量:116702 管理登陸

欧美性大战XXXXX久久久| 精品一区高潮喷吹在线播放| 美妙人妻系列| 无码免费视频aaaaaaaa片| 两个人看的www视频免费完整版| 韩国免费A级毛片久久| 国产精品久久人妻互换| 日韩人妻无码精品无码中文字幕 | 国产成人无码免费看片色哟哟| 国产精品污WWW在线观看| 亚洲精品尤物av在线观看任我爽| 熟女人妻大叫粗大受不了| 妻子4免费完整版中文版| 青青河边草免费视频观看| 免费久久人人爽人人爽av| 免费少妇a级毛片| 国产精品色情国产三级风月奇谭 | 99精品人妻少妇一区二区| 久久精品国产亚洲AV成人 | 人妻人人澡人人添人人爽| 麻豆XXXX乱女少妇精品潘甜甜 | 成年美女黄网站色大片免费看| 和少妇人妻邻居做爰无码 | 亚洲av无码乱码精品国产福利| 人妻臀部不断上下耸动| 无遮挡国产高潮视频免费观看 | 变态另类一区二区SM| 老熟女高潮一区二区三区| 国产精品V欧美精品∨日韩| 777午夜精品久久av蜜桃小说| 国产精品一区二区毛卡片| 日韩乱码人妻无码系列中文字幕| MM1313亚洲精品无码久久| 国产SUV精二区九色| 色情欧美片午夜国产特黄| 国产精品人妻无码久久久奥特曼| 亚洲无码在线播放| 亚洲AV色香蕉一区二区三区| 国产成人精品一区二区三区影院| 久久97久久97精品免视看秋霞| 国产成人无码一区二区三区|