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今天小編或?qū)槟憬忾_PCR反應(yīng)體系中,熒光染料法

瀏覽次數(shù):1679發(fā)布日期:2020-05-28

       PCR的時候,你是否還在費(fèi)心的準(zhǔn)備冰盒,是否還在擔(dān)憂會否因?yàn)槭覝靥邔?dǎo)致酶活降低甚至失效,今天小編或?qū)槟憬忾_這些煩憂。

       在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系中,加入過量熒光染料,該染料只與雙鏈DNA小溝結(jié)合的染料,并不與單鏈DNA鏈結(jié)合,而且在游離狀態(tài)不發(fā)出熒光,只有摻入DNA雙鏈中才可以發(fā)光,因此,在PCR體系中,隨著特異性PCR產(chǎn)物的指數(shù)擴(kuò)增,每個循環(huán)的延伸階段,染料摻入雙鏈DNA中,其熒光信號強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。下圖以SYBR Green I染料為例:

    

反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR)

RT-PCR是一種將cDNA合成與PCR技術(shù)結(jié)合分析基因表達(dá)的快速靈敏的方法,主要用于對表達(dá)信息進(jìn)行檢測或定量分析。在實(shí)際應(yīng)用中,RT—PCR又常常分為一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR。

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